高效液相色譜分析柱的系統(tǒng)由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相，被流動相載入色譜柱（固定相）內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù), 在兩相中作相對運(yùn)動時， 經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出， 通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。
柱結(jié)構(gòu)：
一般色譜柱是由色譜柱管、末端接頭、卡套(又稱密封環(huán))和過濾篩板等組成。
柱連接方式：
高效液相色譜分析柱柱接頭通過過濾片與色譜柱管連接，在色譜分析柱管的上下兩端安裝過濾片。過濾片一般用多孔不銹鋼燒結(jié)材料制成，過濾片上的孔徑小于填料顆粒直徑，可阻擋流動相中極小的機(jī)械雜質(zhì)以保護(hù)色譜柱，但流動相可順利通過。柱入口和柱出口的連接管的死體積越小越好，一般常用窄孔(內(nèi)徑0.13mm)厚壁(1.5～2mm)不銹鋼管，以減少柱外死體積。
柱規(guī)格：
—般采用直形柱管，標(biāo)準(zhǔn)填充柱柱管內(nèi)徑為4.6mm或3.9mm，長10～50cm，填料粒度5～10um，柱效達(dá)5000～10000塊理論塔板/m。使用3～5um填料，柱長可減至5～10cm。當(dāng)使用內(nèi)徑為0.5～1mm的微孔填充柱或內(nèi)徑為30～50um的毛細(xì)管柱時，柱長為15～50cm。
當(dāng)使用粗內(nèi)徑短柱或細(xì)內(nèi)徑長柱時，應(yīng)注意柱內(nèi)體積減小，由柱外效應(yīng)引起的色譜峰形展寬。柱外效應(yīng)是指色譜柱之外的造成色譜峰展寬的因素，主要由進(jìn)樣器、檢測器及它們與柱之間的連接管路所產(chǎn)生。此時應(yīng)對進(jìn)樣器、檢測器和連接接頭作特殊設(shè)計，以減少柱外死體積。
